超濾管分為0.5ml、4ml、15ml三種上樣體積,并有3kd、10kd、30kd、50kd、100kd五種截留分子量??捎糜谏飿悠芳兓?、蛋白質(zhì)濃縮、脫鹽和緩沖液更換等。具體操作使用的時(shí)候一定要注意幾個(gè)點(diǎn)。
1、首先,要選擇合適的超濾管,主要是選擇多大的截留分子量。這個(gè)要根據(jù)自己的實(shí)際情況,通常沒(méi)有特別需要的話,截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3。比如,目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、一般情況下,剛買來(lái)的超濾管是干燥的,在使用前要進(jìn)行一定的預(yù)冷。先要加入水量過(guò)膜的MilliQ水,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。操作的時(shí)候動(dòng)作要輕。
3、不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速有所不同,注意轉(zhuǎn)速和加速度不要太快,否則直接對(duì)超濾膜就有損壞,在實(shí)際使用中,一般轉(zhuǎn)速開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低,這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。
4、對(duì)超濾管要進(jìn)行有序的處理,以實(shí)現(xiàn)重復(fù)利用的效果。以下是簡(jiǎn)單的步驟:倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤(rùn)洗幾次。然后在室溫情況下,平衡超濾管加入0.2M的NaOH溶液。離心10min,倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個(gè)小時(shí),再換新的水,放置幾個(gè)小時(shí),不斷稀釋NaOH濃度。一般來(lái)說(shuō),按照上述步驟和注意事項(xiàng),每根管用三四年不會(huì)壞。
