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技術文章

微生物培養(yǎng)基

培養(yǎng)基(meclium或culture medium)是一種人工配制的、適合微生物生長繁殖或產生代謝產物用的混合養(yǎng)料。任何培養(yǎng)基都應具備微生物所需要的六大營養(yǎng)要素,且其間的比例是合適的。培養(yǎng)基一旦配成,必須立即進行**,否則很快引起雜菌叢生,并破壞其固有成分和性質。

2.2.4.1培養(yǎng)基選用和設計的原則

針對不同的微生物、不同的營養(yǎng)要求,可以采用不同的培養(yǎng)基。但是,培養(yǎng)基的配制必須遵循一定的原則。

(1)目的明確 在設計新培養(yǎng)基前,首先要明確配制該培養(yǎng)基的目的。如果某培養(yǎng)基將用于實驗室研究,則一般不必過多地計較其成本。但必須明確對該培養(yǎng)基是作一般培養(yǎng)用,還是作精細的生理、代謝或遺傳等研究用,再考慮按天然培養(yǎng)基或合成培養(yǎng)基的要求來設計。擬培養(yǎng)的微生物對象也十分重要。不同大類的微生物,對培養(yǎng)基中碳源與氮源問的比例、pH的高低、滲透壓的大小、生長岡子的有無以及特殊成分的添加等都要作相應的考慮。

(2)營養(yǎng)物質應滿足微生物需要不同微生物對營養(yǎng)的需求差異很大,應根據所培養(yǎng)菌種對各營養(yǎng)要素的不同要求進行配制。如異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基成分必須含有機物,而自養(yǎng)傲生物的培養(yǎng)基成分則是無機的。一般培養(yǎng)時可以采用現成的培養(yǎng)基,如**采用肉湯蛋白胨培養(yǎng)基、放線菌采用高氏1號合成培養(yǎng)基、酵母采用麥芽汁培養(yǎng)基、霉菌采用查氏合成培養(yǎng)基。

(3)營養(yǎng)物的濃度和比例協(xié)調培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)要素的數量和比例要合適,否則不能滿足微生物生長的需要或是抑制微生物的生長。在大多數化能異養(yǎng)菌的培養(yǎng)基中,各營養(yǎng)要素間在量上的比例大體符合以下十倍序列的遞減規(guī)律:H20>C源+能源>N源>P、S>K、Mg>生長因子。其中碳源與氮源的比例(即C/N)更為重要。C/N是指在微生物培養(yǎng)基中元素C與N的比值,粗略表示可用還原糖與粗蛋白質含量比。不同微生物要求不同的C/N。如**和酵母菌培養(yǎng)基中的C/N約為5/1。

如果某培養(yǎng)基將用于大規(guī)模的發(fā)酵生產上,則用作“種子”的培養(yǎng)基,一般其營養(yǎng)成分宜豐富些,尤其氮源的含量應較高(即C/N低);相反,如擬用作大量生產代謝產物的發(fā)酵培養(yǎng)基,一般氮源含量宜比“種子”培養(yǎng)基稍低(即C/N高)。除了對不同類型的微生物應考慮其特定條件外,在設計發(fā)酵培養(yǎng)基時,還應特別考慮到生產的代謝產物是初級代謝產物,或是次級代謝產物。如生產次級代謝產物,例如***、維生素或赤霉素等,則應考慮是否在其中加人特殊元素(如維生素B12中的Co)或特定前體物質(如生產芐青霉素時加人的***)。

(4)物理化學條件適宜

①pH 各大類微生物一般都有它們合適的生長pH范圍。**的*適pH在7.0~8.O,放線菌在pH7.5~8.5,酵母菌在pH3.8~6.0,而霉菌則在pH4.0~5.8。對于具體的某一種微生物來說,都有其特定的*適pH范圍。

微生物在生長繁殖過程中會產生引起培養(yǎng)基pH改變的代謝產物,如不適當地加以調節(jié),就會抑制甚至殺死其自身,因而在設計此類培養(yǎng)基時,就要考慮到培養(yǎng)基的pH調節(jié)能力。通過培養(yǎng)基內在成分發(fā)揮的調節(jié)作用.稱為pH的內源調節(jié)。內源調節(jié)主要有以下兩種方法。

**種是采用磷酸緩沖液的方式。調節(jié)K2HPO4和KH 2 PO4兩者濃度比就可獲得從pH6.O至pH7.6的一系列穩(wěn)定的pH,當兩者為等物質的量濃度比時,溶液的pH可穩(wěn)定在pH6.8。其反應原理如下:

K2HP04+HCl→KH 2 P04+KCl

KH 2P04+KOH→K2HP04+H 2 0

**種是采用加入CACO 3作“備用堿”的方式。CACO3在水溶液中溶解度極低,加入至液體或固體培養(yǎng)基中時,不會使培養(yǎng)液的pH明顯升高。但當微生物生長過程中不斷產酸時,它就逐漸被溶解.產生的CO2可以從培養(yǎng)基中逸出,繼而發(fā)揮調節(jié)培養(yǎng)基pH的作用。有時也可用NaHCO3來調節(jié)。

與內源調節(jié)相對應的是外源調節(jié),外源調節(jié)是指按實際需要不斷或間斷流加酸液或堿液到培養(yǎng)液中的調節(jié)方法。

②其他培養(yǎng)基中其他的一些物化指標也會影響微生物的培養(yǎng)。培養(yǎng)基中水的活度應符合微生物的生理要求(aw值在0.63~0.99之間)。大多數等滲溶液適宜微生物的生長,高滲溶液會使細胞發(fā)生質壁分離,而低滲溶液則會使細胞吸水膨脹。少數**如金黃色葡萄球菌則能在3mol/L NaCl的高滲溶液中生長。能在高鹽環(huán)境(2.8~6.2mol/L NaCl)生長的微生物常被稱為嗜鹽微生物。培養(yǎng)基中各種成分及其濃度等指標的優(yōu)化間接地確定了培養(yǎng)基的水活度和滲透壓,通常在配制培養(yǎng)時不必測定這類指標。此外,各種微生物對培養(yǎng)基的氧化還原電位等也有不同的要求。


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