透析就是在生物大分子制備過(guò)程中利用半透膜除去其中的鹽、少量有機(jī)溶劑和生物小分子雜質(zhì)以及濃縮樣品。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)既是用半透膜將大分子蛋白質(zhì)分離出來(lái)。透析時(shí),小于NWCO(截留分子量)的分子在透析膜二邊溶液濃度差產(chǎn)生的擴(kuò)散壓作用下滲過(guò)透析膜,其速度與濃度梯度、膜面積及溫度成正比。欲快速透析可采用直徑較小的透析袋以增加膜面積。更換袋外透析液或用磁力攪拌器,均能提高透析速度。
在透析過(guò)程中樣品在膜的一邊,緩沖液則在另一邊,小分子即向兩邊擴(kuò)散直到平衡為止,而大分子則會(huì)被半透膜截留在另一端。所以只要通過(guò)不斷更換緩沖液,即可將樣品中要除掉的小分子稀釋到足夠低的濃度。不同的分子量需要不同的孔徑。
從本質(zhì)上講仍是膜孔的孔徑控制分子量。例如300KD的透析袋孔徑14nm;100KD--5.5nm50KD--3nm;30KD--2.2nm;20KD--1.8nm;10KD--1.5nm;1KD--1.2nm;5D--1nm。按照球形蛋白分子量計(jì)算的結(jié)果,理論上來(lái)說(shuō)只要所用的超濾膜截留分子量大于**分子量就可以。
分子量不同所選擇的透析袋不同,截留分子量從0.1-0.5到1000KD不等,需謹(jǐn)慎選擇。
透析膜分為生物技術(shù)纖維素酯(CE)膜,PH值范圍:2-9,溫度極限37℃。生物技術(shù)再生纖維素(RC)膜,PH值范圍:2-12,溫度極限60℃。以及標(biāo)準(zhǔn)級(jí)再生纖維素膜,PH值范圍:2-12,溫度極限121℃。