非變性蛋白裂解抽提液
非變性蛋白裂解液是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞和組織的裂解液。能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物*大限度地保留了蛋白的特性和功能。本裂解液裂解的細(xì)胞和組織樣本，可以用于PAGE，Western，**沉淀和**共沉淀等。
產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品組成
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310013
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310014
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非變性裂解液
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50 ml
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100 ml
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蛋白酶抑制劑混合物
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100ul
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200ul
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使用方法：
A． 細(xì)胞裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的非變性裂解液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個(gè)細(xì)胞中加入500ul冷的裂解液（每106個(gè)細(xì)胞加100ul 非變性裂解液。大約相當(dāng)于6孔板的每孔加入100ul~150ul，或一個(gè)75 cm2培養(yǎng)瓶加1~2 ml。裂解液和細(xì)胞應(yīng)充分接觸。如果非變性裂解液不足量，細(xì)胞裂解效率將會(huì)降低），混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，用于下游實(shí)驗(yàn)。
B． 組織裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的非變性裂解液加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100mg組織樣本剪碎，加入1ml裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃，10000rpm條件下離心5分鐘。
4. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，用于下游實(shí)驗(yàn)。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
2. 整個(gè)過程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
儲存條件：
-20℃保存。