膜蛋白提取試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
哺乳動(dòng)物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在**的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會(huì)使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu)，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。
膜蛋白提取試劑盒是一種基于化學(xué)而非去污劑方法的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從細(xì)胞和動(dòng)物組織提取膜蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、**共沉淀、酶活性測(cè)定等蛋白研究。
產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品組成
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310005
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310006
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規(guī)格
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50 assays
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100 assays
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試劑 A
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10ml
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20ml
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試劑 B
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10ml
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20ml
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試劑 C
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10ml
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20ml
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蛋白酶抑制劑混合物
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250ul
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500ul
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使用方法：
A． 細(xì)胞蛋白提取
1. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3. 每20ul細(xì)胞壓積中加入200μl冷的試劑 A，2ul蛋白酶抑制劑混合物，高速渦旋振蕩15秒，置冰上10分鐘。
4. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，16000×g條件下離心5分鐘。
5. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，12000轉(zhuǎn)4℃離心10分鐘取沉淀溶于試劑B中。
6. 試劑B12000轉(zhuǎn)4℃離心10分鐘，取沉淀溶于試劑C中。。
7. 即可得到膜蛋白。
B． 組織蛋白提取
1. 取適量組織樣本剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體（或用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
2. 在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，棄上清。
3. 按照細(xì)胞蛋白的提取方法的第3步驟往下操作即可。
上述蛋白提取物請(qǐng)分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
2. 整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
儲(chǔ)存條件：
-20℃保存。